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如何操作熒光定量PCR儀?

更新時間:2024-10-17瀏覽:293次

  熒光定量PCR儀的操作流程主要包括實驗前準備、反應(yīng)體系設(shè)計、PCR反應(yīng)條件設(shè)置、儀器開機與樣品放置、軟件操作與程序編輯等步驟。以下是對這些步驟的具體介紹:
  
  一、實驗前準備
  
  1、試劑準備:確保所有試劑和設(shè)備的質(zhì)量良好,避免對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。準備好所需的試劑和設(shè)備,包括PCR試劑盒、引物、模板DNA或RNA樣品、PCR儀等。
  
  2、實驗室環(huán)境:在超凈工作臺上進行所有步驟,使用75%乙醇或其他去污劑擦拭工作臺,避免表面污染。進入實驗室后需要佩戴一次性無菌口罩、無菌乳膠手套,盡量避免與同事交談,防止PCR模板污染。
  
  二、反應(yīng)體系設(shè)計
  
  設(shè)計反應(yīng)體系:根據(jù)實驗需要設(shè)計好PCR反應(yīng)體系,包括引物濃度、模板DNA或RNA濃度、試劑盒成分等。合理的反應(yīng)體系設(shè)計是保證實驗成功的關(guān)鍵。
  
  三、PCR反應(yīng)條件設(shè)置
  
  設(shè)定反應(yīng)條件:根據(jù)所用的PCR試劑盒和目標分子的特性,設(shè)置好PCR反應(yīng)的溫度、時間和循環(huán)次數(shù)等條件。合理的PCR反應(yīng)條件能夠提高PCR反應(yīng)的特異性和效率,減少非特異性產(chǎn)物的形成。
  
  四、儀器開機與樣品放置
  
  1、開啟儀器:開啟熒光定量PCR儀及其相連的電腦。點擊PCR儀上的“Eject”按鈕,放入已離心過的八連管樣品,再緩慢關(guān)閉接樣臺。
  
  2、放置樣品:將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml低緣八聯(lián)管,蓋上管蓋;或加入低緣96孔板,用光學(xué)級封膜封好。注意,必須帶一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。
  
  五、軟件操作與程序編輯
  
  1、打開軟件:在電腦上打開與PCR儀配套的軟件,找到對應(yīng)的實驗程序文件夾。根據(jù)實驗需求,選擇或編輯相應(yīng)的程序。編輯過程中,確保所放樣品的地址以及信息準確無誤。
  
  2、保存程序:編輯完成后,點擊“File”選擇“Saveas”,將程序保存到相對應(yīng)的文件夾中,并務(wù)必修改程序名稱(包含日期、時間等信息)。隨后,通過軟件將編輯好的程序傳出到PCR儀上。
  
  總的來說,熒光定量PCR儀的操作雖然涉及多個步驟,但只要按照規(guī)范的流程進行,就可以有效地完成實驗并獲得可靠的結(jié)果。

 

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